Método de determinación da glicosa oxidasa

O principio do método. O método está baseado na especificidade da acción do encima glicosa oxidasa. Este enzima oxida a glicosa en presenza de osíxeno molecular para formar gluconolactona, que hidroliza espontaneamente ao ácido glucónico. A glicosa oxidasa oxida a glicosa para formar peróxido de hidróxeno (H)₂Ah₂), que reacciona coa 4-aminoantipirina e o fenol baixo a acción da peroxidasa. Como resultado, fórmase un composto de cor rosa cuxa densidade óptica a 510 nm é proporcional á concentración de glicosa na mostra.

glicosa + O₂ + H₂Ah → ácido glucónico + H₂Ah₂

2 N₂Ah₂ + 4-aminoantipirina + fenol → quinonimina + 4H₂Ah

Equipamento CPK, centrífuga, termostato, racks, tubos de ensaio, pipetas, material biolóxico, reactivos contidos na solución de traballo.

mostra experimental, ml

mostra estándar, ml

proba de ralentí (N₂O), ml

Solución de calibración de glicosa (referencia)

Os tubos son incubados nun termóstato a 37 ° C durante 15 minutos, logo coloreados nun CPC cun filtro verde en cuvetas cun grosor da capa de 5 mm fronte a unha mostra en branco (N₂O). A cor rosa é estable durante 1 hora despois da incubación.

Cálculo o contido de glicosa é producido pola fórmula:

C =x estándar C onde

C é o contido de glicosa na mostra experimental, mol / l,

Eop - densidade óptica da mostra,

Coma - densidade óptica da mostra de calibración,

Estándar C: o contido na solución de calibración, mol / l.

Valores normais:  recentemente nados - 2,8-4,4 mmol / l

 nenos - 3,9 -5,8 mmol / l

 adultos - 3,9 - 6,2 mmol / l

Hipoglucemia (GHC).O aumento da glicosa no sangue débese a moitas razóns, segundo as cales se distinguen dous grupos de hiperglicemia.

1. Insular: asociada a insulina insuficiente no corpo ou debido á ineficiencia da súa acción.

2. Extrainsular (extrainsular) - non depende da influencia da insulina.

Os seguintes procesos son máis significativos na formación de HHC: aumento da descomposición do glicóxeno, aumento da neoglucoxénese, inhibición da síntese de glicóxeno, diminución da utilización da glicosa tisular baixo a influencia de antagonistas da insulina hormonal: somatotropina, glucorticoides, tiroxina, tirotropina.

A hiperglicemia alimentaria obsérvase con inxestión excesiva de glicosa no sangue (por exemplo, hiperglicemia con carga de azucre). A hiperglucemia "hepática" prodúcese en lesións hepáticas difusas.

A hiperglucemia persistente e grave acompaña a miúdo á diabetes. É habitual illar a diabetes mellitus insulinodependente e a diabetes mellitus non insulinodependentes ou, respectivamente, a diabetes mellitus tipo I e a diabetes mellitus tipo II. A formación de diabetes tipo I está asociada principalmente a síntese prexudicada e metabolismo da insulina.

O segundo grupo de hiperglicemia está asociado principalmente a hiperfunción das glándulas endócrinas que producen hormonas: antagonistas da insulina. Obsérvase en enfermidades como a síndrome e enfermidade de Itsenko-Cushing, acromegalía, tirotoxicosis, feocromocitoma, glucoganoma. Os niveis de glicosa no sangue aumentan con certas enfermidades hepáticas (en particular, nun 10-30% dos pacientes con cirrosis hepática), hemocromatosis (cirrosis hepática pigmentada, diabetes de bronce).

Hipoglicemia (GPG) - unha diminución da glicosa no sangue - a maioría das veces asociada a un aumento absoluto ou relativo dos niveis de insulina no sangue. A hipoglucemia extrapancreática obsérvase como consecuencia dun desequilibrio entre a gravidade dos procesos de glicoxenólise e gliconeoxénese no fígado en hepatite aguda e crónica, cirrosis, distrofia hepática aguda e subaguda, intoxicación por alcohol, envelenamento con arsénico, fósforo, con ictericia obstructiva prolongada, fígado primario . A diminución da concentración de glicosa no sangue adoita observarse en pacientes con cancro do esófago e outros tumores malignos de localización fóra do páncreas (fibroma, fibrosarcoma, neuroma), así como con vómitos indomables, anorexia, diabetes hepático, uremia, lactación profusa e glucosuria en mulleres embarazadas.

A hipoglicemia pode ser de orixe central debido a un trauma mental, encefalite, hemorragia subaracnoidea, tumor cerebral.

1. Trastornos herdados da dixestión de hidratos de carbono.

2. Que tipos de hiperglucoseemia son coñecidos por vostede?

3. Cales son as causas da hiperglucoseemia patolóxica?

4. Cal é a causa da diabetes mellitus insulina dependente?

5. Cales son as causas bioquímicas das enfermidades hereditarias: a) glicogénose? b) aglicoxose? c) fructosemia? d) galactosemia?

6. Cales son os cambios bioquímicos no metabolismo dos carbohidratos durante o xaxún?

7. O principio do método para determinar a tolerancia á glicosa.

Cando se prescribe o método da glicosa oxidasa?

Esta proba úsase para detectar a tolerancia ao azucre deteriorada e o desenvolvemento de prediabetes, así como na altura da enfermidade. Pero con tales fins, a análise raramente se usa, debido ao seu elevado custo e á longa expectativa dun resultado. Na maioría das veces, a determinación de glicosa no sangue e na orina mediante este método úsase no diagnóstico diferencial de enfermidades como:

O azucre redúcese ao instante! A diabetes co paso do tempo pode levar a unha serie de enfermidades, como problemas de visión, condicións de pel e cabelo, úlceras, gangrena e incluso tumores cancerosos. A xente ensinou a experiencia amarga para normalizar os niveis de azucre. ler máis.

• síndrome de intolerancia á lactosa,
• intolerancia á fructosa,
• secreción de fructosa con fluídos corporais,
• aumento da concentración de pentosa na orina.

A indubidable vantaxe da proba de glicosa oxidasa é a súa precisión.

Cal é a base deste método?

Existen varios métodos para determinar a concentración de glicosa no sangue, pero a glicosa oxidasa é a máis precisa. Baséase en que durante a interacción do azucre co osíxeno atmosférico, o reactivo é oxidado. A peróxido de hidróxeno é liberado na solución. Esta sustancia interactúa coa ortotoluidina para formar un composto coloreado. Para o comportamento desta reacción é necesaria a presenza de encimas especiais. Durante a reacción de oxidación, a glicosa oxidasa debe estar presente e, ao manchar o líquido, a oxidasa debe estar presente. A intensidade da cor da solución dependerá do contido de glicosa e será máis intensa polo seu alto contido.

A esencia da determinación da glicosa en glicosa

A avaliación do resultado prodúcese mediante o método cuantitativo da fotometría despois do mesmo período de tempo. É obrigatorio usar unha solución de calibración que conteña unha certa norma de azucre declarada e, partindo dela, pode xulgar a concentración de glicosa nos fluídos do corpo, a miúdo no sangue.

Como se realiza a análise?

O material é tomado do paciente cun estómago baleiro. Para a proba utilízase sangue venoso nunha cantidade de 5 ml. En vésperas do diagnóstico, ao paciente móstrase unha dieta estrita. Isto permitirá xulgar a fiabilidade do resultado e excluír posibles erros de análise. 2 días antes de tomar o sangue, o paciente debe abandonar os malos hábitos de beber alcol e fumar. Tamén é necesario limitar a inxestión de alimentos excesivamente doces e evitar situacións estresantes sempre que sexa posible.

Para obter plasma con azucre, o sangue é centrifugado.

A maioría das veces, este método para determinar a concentración de glicosa realízase por centrifugación, que son elementos illados. A cantidade de azucre xa está determinada no plasma. Cando se engaden todos os reactivos necesarios, a cor obsérvase despois de 20 minutos se a proba se realiza a temperatura ambiente. O cálculo da glicosa realízase segundo o calendario de calibración ou usando a regra das porcións.

Reactivos de investigación

Para determinar o azucre, é máis conveniente empregar métodos expresos para determinar a glicosa no sangue. Isto débese á facilidade de uso e aos resultados rápidos. Ademais, o paciente non necesita acudir ao laboratorio ou ao hospital. Pero a diferenza da proba de glicosa oxidasa, este diagnóstico non é fiable. Xa que non diferencia a glicosa doutros azucres e determina a súa concentración xuntos.

A base da reacción á glicosa oxidasa é a solución de cloruro de sodio ao 9% e o sulfato de cinc ao 50%. Engádense no estadio de centrifugación do sangue. Ademais, úsase unha solución tampón con ácido acético e acetato de sodio. O método de valoración determina o seu pH en 4,8. Despois diso, engádese glicosa oxidasa, debido á que se libera peróxido de hidróxeno e peroxidasa, que participa na tinción da solución ata a concentración desexada para obter un resultado preciso.

Normas na análise

A medición do azucre realízase en unidades especiais - milimoles por litro de solución.

O exame sanguíneo de glucosa oxidasa é obrigatorio nun estómago baleiro e use isto ou plasma ou soro. A norma da súa cantidade de adultos, tanto para mulleres como para homes, é de 3,3-5,5. Para os menores de 15 anos, esta cifra é lixeiramente menor e oscilan entre os 3,2 e 5,3. Nos recentemente nados, a glicosa no sangue é de 1,7-4,2. Obsérvase un aumento dos indicadores co desenvolvemento dun paciente con diabetes mellitus ou con tolerancia á glicosa deteriorada. Esta condición é prediabetes e, se non se trata a tempo, levará pronto ao desenvolvemento desta patoloxía grave.

¿Aínda parece imposible curar a diabetes?

A xulgar polo feito de estar lendo estas liñas, a vitoria na loita contra o azucre no sangue aínda non está do teu lado.

E xa pensou no tratamento hospitalario? É comprensible, porque a diabetes é unha enfermidade moi perigosa que, se non é tratada, pode producir a morte. Set constante, micción rápida, visión borrosa. Todos estes síntomas son coñecidos de primeira man.

Pero é posible tratar a causa máis que o efecto? Recomendamos ler un artigo sobre os tratamentos actuais contra a diabetes. Lea o artigo >>